Rol de las leptospiras intermedias en animales y medio ambiente

Resumen

La leptospirosis es una enfermedad infecto-contagiosa, aguda y febril causada por una bacteria perteneciente al género Leptospira spp. que afecta a los animales silvestres y domésticos, los cuales actúan como fuente de infección para el hombre. En Argentina, es una enfermedad endémica con brotes epidémicos. El ciclo epidemiológico de esta zoonosis es complejo, ya que interactúan varias especies que conviven en biocenosis, tanto animales silvestres como domésticos, siendo el hombre hospedador accidental. Las leptospiras intermedias pertenecen a un grupo transicional entre las especies patógenas y saprófitas que afianza la denominación de leptospiras intermedias a este grupo tan particular y de características únicas. Se encuentran más relacionadas con especies patógenas que con las especies saprofitas de este género. Han sido aisladas de casos humanos con cuadros febriles sin diagnósticos determinantes y de casos fatales recientemente, en algunos países. Las leptospiras antes se encontraban taxonómicamente clasificadas en patógenas y no patógenas. Con estudios filogenéticos se observaron tres clusters: patógenas, intermedias y no patógenas. En la actualidad hay 9 especies patógenas, 5 intermedias y 7 no patógenas. La patogenicidad de las especies intermedias, nuevo grupo de leptospiras, sigue en debate.En Argentina, hasta ahora no se habían investigado las leptospiras intermedias. Podrían jugar un rol importante en casos clínicos de animales de producción sin un diagnóstico de confirmación o estar relacionadas con casos leves de leptospirosis. Los factores de virulencia de las leptospiras pueden ser específicos, exclusivos de cada grupo, patógenas e intermedias, esto explicaría el polimorfismo de su presentación clínica. En este estudio se trabajó con muestras animales y ambientales para investigar la presencia de cepas de leptospiras intermedias, por primera vez en nuestro país. Se realizó un diagnóstico de la situación epidemiológica de este grupo particular de leptospiras, utilizando técnicas bacteriológicas, serológicas y moleculares. Se procesaron 256 muestras animales, 198 bovinas, 58 porcinas, 41 ambientales (agua) de las siguientes zonas: 9 del lago Campus Pilar Universidad del Salvador; 8 del dique Luján; 8 del lago Nordelta, Pilar; 6 de Zárate (2 Zárate Club, 2 Zárate Parque y 2 Zárate Costa); 10 del partido de Hurlingham (5 arroyo Ñandú, 5 río Reconquista), con el objetivo de detectar leptospiras intermedias a través del aislamiento y/o la detección por técnicas moleculares. Del total de muestras procesadas, se lograron obtener 3 cultivos positivos, y se logró aislar por primera vez Leptospira meyeri. Por otro lado, no se logró detectar positividad en muestras animales. Para poder caracterizar molecularmente las cepas de leptospiras intermedias aisladas durante este estudio, se diseñaron primers específicos para la detección de leptospiras intermedias. A partir de los cultivos positivos, se procedió a la extracción de ADN genómico utilizando la resina Chelex-100; y se hizo PCR 16S ARNr para poder secuenciar las muestras, empleando primers Bak2F y Bak2R. Los perfiles dieron compatible con el grupo intermedias y las muestras fueron enviadas a secuenciar para confirmar la especie. Para la identificación, se utilizó el programa informático Blast de alineamiento de secuencias capaz de comparar una secuencia problema contra una gran cantidad de secuencias. Es la primera vez que se detectan leptospiras intermedias en nuestro país. El estudio de estas leptospiras podría explicar los casos subclínicos y los casos que no llegan a un diagnóstico de confirmación, dado que las herramientas utilizadas hasta el momento no las detectaban. Podemos concluir que existen en Argentina cepas de leptospiras intermedias en el ambiente y aún no se han detectado en poblaciones animales