Validación de ELISA indirecto para evaluación de anticuerpos bovinos y de cobayo contra virus parainfluenza 3 bovino (bpi3). Evaluación de seroprevalencia a virus bpi3 en rodeos bovinos de la provincia de Buenos Aires

Resumen

En Argentina, la explotación ganadera ocupa un lugar preponderante de la economía. Un gran porcentaje de las pérdidas se encuentra vinculado a las enfermedades infecciosas. Entre las enfermedades más relevantes se encuentran las del complejo respiratorio bovino (CRB), la parainfluenza 3 (PI3) es uno de los patógenos implicados. El virus de PI3 es endémico del ganado bovino, presenta distribución mundial. La seroprevalencia en nuestro país es 60-90 %. El objetivo fue validar dos ELISA indirectos que cuantifiquen anticuerpos bovinos y de cobayos contra PI3 para complementar otros. La validación del ELISA bovino permitirá determinar seroprevalencia de PI3 en rodeos bovinos de Buenos Aires y aportará al desarrollo del modelo cobayo que evalúa calidad inmunogénica de vacunas comerciales. Se continuó el desarrollo del ELISA PI3 experimental de bovinos planteado en este trabajo. Para establecer el punto de corte se realizó una curva de frecuencia con sueros positivos y negativos de historia conocida. El punto de corte se determinó en una densidad óptica corregida mayor o igual a 0.3, a partir de la cual los sueros se consideran positivos. Para calcular la repetibilidad se evaluaron los resultados de una misma muestra dentro de una misma placa y, efectuando series en 6 placas a la vez, (variación entre placas). Para el parámetro repetibilidad se obtuvo un coeficiente de variación (desviación estándar de las réplicas dividida por la media de las réplicas) de 22.8 % entre réplicas y un coeficiente de variación de 12 % entre placas. La linealidad es la capacidad del ensayo, dentro de un determinado intervalo, de dar un resultado que sea proporcional a la cantidad del analito a determinar. Se evaluó mediante la realización de 16 repeticiones de un suero positivo en 6 diluciones base 4. La linealidad obtenida fue de un 76 % (Regresión lineal, R2). La sensibilidad representa los sueros detectados positivos por la técnica del total de sueros fehacientemente positivos. La especificidad representa los sueros detectados negativos por la técnica del total de sueros fehacientemente negativos. Ambos parámetros fueron calculados evaluando una serie de muestras de referencia, tomadas de animales de situación sanitaria conocida. Se evaluaron los sueros por inhibición de la hemoaglutinación para establecer la concordancia entre ambas técnicas, mediante el índice Kappa Ponderado. Se logró calcular el punto de corte del ELISA y se determinó que la sensibilidad es del 92 % con una especificidad del 100 %.