Corderos y terneros multitransgénicos expresando proteínas fluorescentes obtenidos por transferencia de genes mediada por espermatozoides

Patricio Díaz Pumará, Sabrina Vega, Paula Rafaelli, Mónica Vázquez-Levin, Gabriel Iorio, Juan Rosales, Mercedes Menarini, Daniela Videla, Martín Brutti, Julia Aguerre, Melisa Farías

Resumen


El objetivo de nuestro trabajo fue incrementar la cantidad de embriones y animales de granja adultos reproductivamente viables y genéticamente modificados que se logran por “transferencia de genes mediada por espermatozoides” (TGME). Actualmente resultan escasos los avances en este ámbito, pues las técnicas vigentes son muy costosas y de bajo rendimiento. A partir de los resultados logrados con la técnica Fecundación In Vitro (FIV) de ovocitos obtenidos a partir de ovarios de frigorífico, se desarrolló un protocolo que aplica la técnica SMGT por medio de Inseminación Artificial Laparoscópica (IAUL) con semen tratado en ovejas sincronizadas y superovuladas. Con este fin, 4 ovejas frisonas adultas fueron sometidas a tratamientos hormonales para lograr celos multiovulatorios en fechas prediseñadas. De las cuatro ovejas, todas fueron inseminadas por IAUL, una con semen sin tratamiento (testigo) y tres con semen tratado. Siete días más tarde una de las ovejas inseminadas con semen tratado produjo 9 óvulos, tres de ellos fecundados con diferente estatus de multiplicación celular. Los tres embriones expresaron en todas sus blastómeras los plásmidos incorporados por el esperma tratado. Ninguno de los ovocitos no fecundados evidenció fluorescencia roja o verde. Se utilizaron dos plásmidos, uno que incorpora un gen que expresa una proteína de fluorescencia color rojo (Cy3) y otra que expresa color verde (GFP). Cinco meses más tarde las cuatro ovejas parieron seis corderos (dos con mellizos). Los cuatro corderos de las ovejas inseminadas con espermatozoides tratados resultaron genéticamente modificados, y evidenciaron fluorescencia verde al ser iluminados con luz UV. Los dos corderos de la oveja testigo resultaron negativos bajo la misma iluminación. Se concluyó que los espermatozoides, apropiadamente tratados con ambos plásmidos, resultaron vectores eficaces para incorporar e integrar el transgen en el genoma resultante de los embriones y de los individuos nacidos viables. Este trabajo fue presentado en las jornadas conjuntas de la Asociación Europea de Transferencia de Embriones y de la Sociedad Brasilera de Tecnología de Embriones en agosto-septiembre de 2016.

Palabras clave


animales transgénicos; fecundación in-vitro; espermatozoide

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