Detección de leptospiras patógenas en bovinos mediante amplificación isotérmica mediada por la formación de loops (LAMP)

Resumen

La leptospirosis es una enfermedad infecciosa de distribución mundial causada por una espiroqueta del género Leptospira spp., endémica en nuestro país y de difícil diagnóstico por su presentación polimórfica. La técnica gold standart para diagnosticar leptospirosis es el test de microaglutinación (MAT). El objetivo de esta investigación fue probar si hay correlación entre el diagnóstico serológico por MAT y la presencia de ADN en suero usando la técnica LAMP para diagnosticar leptospiras en animales domésticos. Fueron utilizados 80 sueros caninos de la provincia de Buenos Aires para testear anticuerpos antileptospiras con Aglutinación microscópica (MAT), usando 10 cepas de Leptospira spp. (Leptospira interrogans serovar Canicola, serovar Hardjo, serovar Hebdomadis, serovar Icterohaemorrhagiae, serovar Pomona, serovar Pyrogenes, serovar Wolffi, Leptospira borgpeterseni serovar Castellonis, serovar Tarassovi, y Leptospira kirshneri serovar Grippothyphosa). Se extrajo ADN leptospiral de las muestras usando resina Chelex 100 para ser usado como templado para PCR (reacción en cadena de la polimerasa) específico de leptospira y loop-mediated isothermal amplification (LAMP). Se usó un PCR para amplificar secuencias características del ADN utilizando primers específicos (técnica Gravekamp et al modificada) y para la reacción de LAMP se utilizó la técnica descripta por Koizumi et al., 2012. El producto obtenido fue incubado usando una coloración denominada verde de malaquita. Se obtuvieron óptimos resultados. De los 80 sueros caninos analizados, 48 fueron positivos a MAT. Doce de ellos positivos por PCR y LAMP. Aquellos sueros positivos a MAT y negativos a PCR y LAMP, presentaron títulos muy bajos a MAT (1/200). Los sueros negativos a MAT, lo fueron también a PCR y LAMP. PCR y LAMP mostraron la misma sensibilidad detectando el ADN leptospiral. Estos resultados demuestran que es posible usar LAMP para la detección de leptospirosis en caninos y que la MAT tiene una mayor sensibilidad que la PCR y LAMP actualmente disponibles. Tras estas pruebas satisfactorias, se sigue investigando en bovino.